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Illumina平臺NGS工作流程知多少?

更新時間:2021-06-01 點擊次數(shù):972

新一代測序工作流程包括三個基本步驟:文庫制備、測序和數(shù)據(jù)分析。了解每一步驟的基本知識以及如何規(guī)劃您的NGS工作流程。

NGS工作流程的準(zhǔn)備工作

大多數(shù)NGS工作流程都需要在提取后進行QC步驟。我們推薦使用紫外分光光度法來評估純度,使用熒光分析法進行核酸定量。

NGS工作流程的第1步:文庫制備

為了節(jié)省資源,可以將多個文庫混合在一起,在同一運行中進行測序——該過程稱為多重分析。接頭連接過程中,標(biāo)簽序列(或說“條形碼”)會添加到每個文庫。這些條形碼可以在數(shù)據(jù)分析過程中區(qū)分文庫。

NGS工作流程的第2步:測序

在邊合成邊測序(SBS)過程中,化學(xué)修飾的核苷酸會通過天然的互補性與DNA模板鏈結(jié)合。每個核苷酸都有一個熒光標(biāo)記和一個可逆終止子,后者可以阻止下一個堿基的摻入。熒光信號可以指示出加入的核苷酸種類,終止子被切割后,下一個堿基才可以繼續(xù)結(jié)合。

 

NGS工作流程的第3步:數(shù)據(jù)分析

如今,您可以使用直觀的數(shù)據(jù)分析應(yīng)用程序來分析NGS數(shù)據(jù),無需進行生物信息學(xué)培訓(xùn)或另外雇傭?qū)嶒炇胰藛T。這些工具可以進行序列比對、變異檢出、數(shù)據(jù)可視化或解讀。

 

 

 

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